Khóa luận Phân lập và tạo dòng nguyên bào sợi (Fibroblast) người từ bánh nhau

PHẦN I : GIỚI THIỆU VỀ ĐỀ TÀI

I. ĐẶT VẤN ĐỀ. 1

II. MỤCTIÊU ĐỀ TÀI . 5

II.1 MỤC TIÊU TỔNG QUÁT. 5

II.2 MỤC TIÊU CỤ THỂ . 5

PHẦN II : TỔNG QUAN TÀI LIỆU

I. SỰ HÌNH THÀNH VÀ PHÁT TRIỂN CỦA NHAU. 6

I.1 VỊ TRÍ LÀMTỔ CỦA PHÔI . 6

I.2 CÁC THÀNH PHẦN CẤU TẠO CỦANHAU . 6

I.2.1 BÁNH NHAU. 6

I.2.2 MÀNG ỐI . 7

I.2.3 MÀNG ĐỆM . 7

I.2.4 HỒ MÁU HAY KHOẢNG GIAN GAI NHAU . 7

I.2.5 VÁCH NHAU. 7

I.2.6 MÚINHAU. 7

I.2.7 ĐĨA ĐÁY . 8

I.2.8 VÒNG VIỀN HAY BỜ GIỚI HẠN NGOẠI VI. 8

I.2.9 DÂYRỐN. 8

I.2.10 MÀNG NHAU. 8

I.3 SỰ TẠO NHAU . 9

I.3.1 SỰ TẠO NHAU TỪ PHÍA CON . 10

I.3.1.1 SỰ TẠO TÚIĐỆM . 10

I.3.1.2 SỰ TẠO CÂY GAI NHAU (SỰ TẠOĐĨA ĐỆM) . 10

I.3.2 SỰ TẠO NHAU TỪ PHÍAMẸ . 12

I.3.2.1 CẤU TRÚC MÔ HỌC NỘI MẠC TỬ CUNG . 12

I.3.2.2 SỰ PHÁT TRIỂN CỦA MÀNG RỤNG THÀNH. 12

I.3.2.3 SỰ PHÁT TRIỂN CỦA MÀNG RỤNG BAO . 13

I.3.2.4 SỰ PHÁT TRIỂN CỦA MÀNG RỤNG ĐÁY . 13

I.4 CHỨC NĂNG CỦA NHAU . 14

I.4.1 CHỨC NĂNG TRAO ĐỔI CHẤT . 14

I.4.2 CHỨC NĂNG BÀI TIẾT HORMONE . 15

I.4.3 CHỨC NĂNG MIỄN DỊCH . 15

II. ĐẠI CƯƠNG VỀ NGUYÊN BÀO SỢI . 16

II.1 ĐẶC ĐIỂM CHUNG . 16

II.2 TẾ BÀO SỢI (FIBROCYTE) . 18

II.2.1 NGUỒN GỐC . 18

II.2.2 HÌNHDẠNG . 19

II.2.3 CHỨC NĂNG . 21

II.3 NGUYÊN BÀO SỢI (FIBROBLAST) . 21

II.3.1 NGUỒN GỐC. 21

II.3.2 HÌNH DẠNG . 22

II.3.3 CHỨC NĂNG . 23

II.3.4 KHOẢNG ĐỜI . 25

III. CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN VIỆC NUÔI TẾ BÀO . 25

III.1 GIÁTHỂ . 25

III.2 PHA KHÍ . 26

III.2.1 OXYGEN . 26

III.2.2 CO2. 27

III.3 MÔI TRƯỜNG VÀ CÁC YẾU TỐ BỔ SUNG . 27

III.4 ĐẶC TÍNH VẬT LÝ . 29

III.4.1PH . 29

III.4.2 DUNG DỊCH ĐỆM . 29

III.4.3 ÁP SUẤT THẨM THẤU . 30

III.4.4 NHIỆT ĐỘ . 30

III.4.5 TÍNH NHỚT . 30

III.4.6 ÁP LỰC SỨCCĂNG BỀ MẶT VÀ SỰ TẠO BỌT. . 30

IV. KHÁI QUÁT VỀ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT. 31

IV.1 THÀNH PHẦN MÔI TRƯỜNG. 31

IV.1.1 DUNG DỊCHMUỐI ĐỆM. 31

IV.1.2 AMINO ACID . 32

IV.1.3 VITAMINE . 32

IV.1.4 MUỐI. 32

IV.1.5 GLUCOSE. 33

IV.1.6 HUYẾTTHANH. 33

IV.2 MỘT VÀI LOẠI MÔI TRƯỜNG ĐƯỢC SỬ DỤNG TRONG NUÔI CẤY TẾ BÀO VÀ

MÔ ĐỘNG VẬT 35 .

IV.2.1 MÔI TRƯỜNG BM . 35

IV.2.2 MÔI TRƯỜNG EMEM . 35

IV.2.3 MÔI TRƯỜNG DMEM.35

IV.2.4 MÔI TRƯỜNG F10, F12. 35

IV.2.5 MÔI TRƯỜNG ISCOVE. 35

IV.2.6 MÔI TRƯỜNG 5A . 36

IV.2.7 MÔI TRƯỜNG RPMI – 1640 . 36

IV.2.8 MÔI TRƯỜNG 199 . 36

IV.3 ĐẶC ĐIỂM BA LOẠI MÔI TRƯỜNG EMEM, DMEM VÀ AMNIOMAX ĐƯỢC SỬ

DỤNG ĐỂ NUÔI NGUYÊN BÀO SỢI TRONG ĐỀ TÀI NÀY

IV.3.1 MINIMUM ESSENTIAL MEDIUM (MEM) . 36

IV.3.1.1 MÔ TẢ SẢNPHẨM. 36

IV.3.1.2 THÀNH PHẦN MÔI TRƯỜNG EMEM . 37

IV.3.1.3 ĐIỀU KIỆN BẢO QUẢN . 39

IV.3.1.4 CÁCH THỨC SỬ DỤNG. 39

IV.3.2 DULBECCO’S MODIFIED EAGLE’S MEDIUM . 39

IV.3.2.1 MÔ TẢ SẢN PHẨM . 40

IV.3.2.2 THÀNH PHẦN CỦA DMEM . 40

IV.3.2.3 ĐIỀU KIỆN BẢO QUẢN . 42

IV.3.2.4 ĐẶC TÍNH MÔI TRƯỜNG. 42

IV.3.3 SẢN PHẨM AMNIOMAX™-C100 . 43

IV.3.3.1 MÔ TẢ SẢN PHẨM . 43

IV.3.3.2 CÔNG THỨC MÔI TRƯỜNG . 43

IV.3.3.3 ĐIỀU KIỆN GIỮ . 44

IV.3.3.4 CÁCH THỨC SỬ DỤNG . 44

V. ỨNG DỤNG CỦA VIỆC NUÔI CẤY NGUYÊN BÀO SỢI . 44

V.1 ỨNG DỤNG TRONG LĨNH VỰC Y HỌC. 44

V.2 ỨNG DỤNG TRONG DƯỢC KHOA . 44

V.3 ỨNG DỤNG TRONG NGHIÊN CỨU SINH HỌC. 44

V.4 ỨNG DỤNG TRONG CHỌN GIỐNG VẬT NUÔI. 45

PHẦN III : PHƯƠNG PHÁP

III.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU. 46

III.1 CÁC MỤC TIÊU CẦN ĐƯỢC KHẢOSÁT . 46

III.2 TRÌNH TỰ THÍ NGHIỆM. 47

III.3 CÁC QUY TRÌNH CHÍNH ĐƯỢC SỬ DỤNG TRONG THÍ NGHIỆM . 48

III.3.1 VÔ TRÙNG DỤNG CỤ VÀ HOÁ CHẤT . 48

III.3.2 VÔ TRÙNG NƠI TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM . 48

III.3.3 CÁC QUY TRÌNH SỬ DỤNG TRONG THÍ NGHIỆM . 49

III.3.3.1 THU NHẬN VÀ XỬ LÝ MẪU . 49

III.3.3.2 PHÂN LẬP VÀ TÁCH KHỐI MÔ . 49

III.3.3.3 CÁC QUY TRÌNH NUÔI TẾ BÀO . 50

III.3.3.4 PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH MẬT ĐỘ TẾ BÀO BẰNG PHỒNG ĐẾM NEUBAUER

51

III.3.3.5 PHƯƠNG PHÁP THAY MÔI TRƯỜNG . 52

III.3.3.6 CẤY CHUYỀN TẾ BÀO . 53

III.3.3.7 CÁCH ĐẾM TẾ BÀO TRÊN QUANG TRƯỜNG 20X . 53

III.3.4 DỤNG CỤ – THIẾT BỊ – HÓA CHẤT. 54

III.3.4.1 DỤNG CỤ . 54

III.3.4.2 THIẾT BỊ . 54

III.3.4.3 HÓA CHẤT . 56

III.3.4.4 MÔI TRƯỜNG. 56

Phân lập và tạo dòng nguyên bào sợi người từ mẫu mô nhau Huỳnh Duy Thảo

5

PHẦN IV: KẾT QUẢ – BIỆN LUẬN

IV.1 KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG PHÁT TRIỂN CỦA NGUYÊN BÀO SỢI TỪ MÔ

NHAU .57

IV.1.1 KẾT QỦA QUAN SÁT MẪU MÔ NHAU THU NHẬN TỪ MỔ NỌI SOI Ở TAY VÒI

.57

IV.1.2 KẾT QỦA QUAN SÁT MẪU MÔ NHAU THU NHẬN QUA ĐƯỜNG SANH MỔ Ở

NHAU ĐỦ THÁNG .57

IV.2 KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TĂNG TRƯỞNG CỦA NGUYÊN BÀO SỢI THU

NHẬN TỪ MẪU MÔ NHAU SỔ TRÊN CÁC LOẠI MÔI TRƯỜNG KHÁC NHAU. . 60

IV.2.1 KẾT QUẢ. 61

IV.2.1.1 NGÀY THỨ NHẤT . 61

IV.2.1.2 NGÀY THỨ HAI. 63

IV.2.1.3 NGÀY THỨ BA. 65

IV.2.1.4 NGÀY THỨ TƯ. 67

IV.2.1.5 NGÀY THỨ NĂM. 69

PHẦN V: BÀN LUẬN. 72

PHẦN VI : KẾT LUẬN. 77

TÀI LIỆU THAM KHẢO. 79

PHỤ LỤC. . 85