Luận văn Khảo sát khả năng tổng hợp amylase, protease của chủng vi khuẩn phân lập từ ao nuôi cá tra

MỤC LỤC

Trang

Trang phụbìa

Lời cảm ơn

Danh mục các chữviết tắt

Danh mục các Bảng biểu

Danh mục Hình - Biểu đồ- Sơ đồ- Đồthị

LỜI MỞ ĐẦU

PHẦN 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU.1

1.1 Thực trạng ô nhiễm do nghềnuôi cá Tra trên địa bàn tỉnh Đồng Tháp.1

1.1.1 Khái quát vềngành nuôi trồng thủy sản và nghềnuôi cá Tra .1

1.1.2 Một sốtác động tiêu cực lên môi trường do nghềnuôi cá Tra.3

1.2. Một sốgiải pháp giúp hạn chếvà khắc phục tình trạng ô nhiễm.8

1.2.1 Các giải pháp vềquản lý .8

1.2.2 Các giải pháp vềquy hoạch.9

1.2.3 Các giải pháp vềkhoa học công nghệ.9

1.2.4 Các giải pháp vềkỹthuật .10

1.3 Khái quát vềhệvi khuẩn trong nước.12

1.3.1 Vi khuẩn trong nước ngọt.12

1.3.2 Một sốchuyển hóa vật chất do vi khuẩn dịdưỡng trong nước .13

1.3.2.1 Thủy phân tinh bột.13

1.3.2.2 Chuyển hóa protein.14

1.3.2.3 Ý nghĩa của quá trình amon hóa protein .16

PHẦN 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP.19

2.1. Vật liệu.19

2.1.1 Chủng vi sinh vật .19

2.1.2 Môi trường phân lập, giữgiống và nuôi cấy .19

2.1.2.1. Môi trường phân lập và nuôi cấy.19

2.1.2.2 Môi trường khảo sát amylase ngoại bào.20

2.1.2.3 Môi trường khảo sát protease ngoại bào .21

2.1.2.4 Môi trường nuôi cấy khảo sát hoạt độamylase .21

2.1.2.5 Môi trường nuôi cấy khảo sát hoạt độprotease .22

2.1.2.6 Môi trường khảo sát một số điều kiện ảnh hưởng lên

hoạt độamylase .23

2.1.2.7 Môi trường khảo sát một số điều kiện ảnh hưởng lên

hoạt độprotease .24

2.1.2.8 Môi trường nước ao cá Tra.24

2.2 Phương pháp.25

2.2.1 phương pháp phân lập: .25

2.2.1.1 Phương pháp lấy mẫu nước .25

2.2.1.2 Phương pháp phân lập và giữgiống .25

2.2.1.3 Phương pháp nhuộm Gram.25

2.2.1.4 Phương pháp quan sát vi sinh vật.26

2.2.2 Phương pháp xác định trực tiếp sốlượng vi sinh vật bằng buồng

đếm hồng cầu: .27

2.2.3 Phương pháp định lượng tếbào bằng phương pháp đo mật độquang .28

2.2.4 Phương pháp khảo sát khảnăng tổng hợp amylase, protease ngoại bào .28

2.2.4.1 Amylase .28

2.2.4.2 Protease .29

2.2.5 Phương pháp xác định hoạt độprotease theo Anson .30

2.2.6 Phương pháp xác định hoạt độamylase theo Heinkel.31

2.2.7 Phương pháp nuôi cấy vi sinh vật.33

2.2.7.1 Phương pháp cấy chuyền và giữgiống trên môi trường

thạch nghiêng .33

2.2.7.2 Phương pháp nuôi cấy bềsâu (nuôi cấy chìm).33

2.2.8 Phương pháp thu nhận dịch enzyme thô .34

2.2.9 Phương pháp xác định thời gian nuôi cấy vi khuẩn đểthu nhận

protease và amylase có hoạt độcao nhất.34

2.2.10 Phương pháp định danh .35

2.2.11 Phương pháp khảo sát tác dụng của chủng vi khuẩn lên môi

trường nước ao nuôi cá Tra .35

2.2.12. Phương pháp xác định pH .35

2.2.13 Phương pháp xác định Carbon hữu cơtổng số.36

2.2.14 Phương pháp xác định Tổng NH3.37

2.2.15 Phương pháp xác định tổng chất rắn lơlửng .39

2.2.16 Phương pháp xác định tổng lượng vi sinh .40

2.2.17 Phương pháp sửdụng phần mềm Microsoft Exel vào xửlý,

tính toán các kết quảthí nghiệm .41

2.2.18 Phương pháp bốtrí thí nghiệm và sơ đồthí nghiệm .41

2.2.18.1 Phương pháp bốtrí thí nghiệm .41

2.2.18.2 Sơ đồthí nghiệm.41

PHẦN 3: KẾT QUẢVÀ BIỆN LUẬN.43

3.1 Phân lập, làm thuần và chọn lọc.43

3.1.1 Phân lập và làm thuần các chủng vi khuẩn từmẫu nước ao nuôi cá Tra .43

3.1.1.1 Phân lập và làm thuần.43

3.1.1.2 Nhuộm Gram .44

3.1.2 Định lượng khảnăng tổng hợp amylase và protease của các

chủng vi khuẩn phân lập được trên môi trường thạch đĩa.46

3.1.2.1 Trên môi trường tăng sinh amylase.46

3.1.2.2 Trên môi trường tăng sinh protease.48

3.1.3 Khảo sát khảnăng tổng hợp amylase và protease của một số

chủng cho hoạt tính cao trên môi trường lỏng .49

3.1.3.1 Khảnăng tổng hợp amylase của các chủng 7, 8, 10, 12,

15.1 trên môi trường tăng sinh amylase .49

3.1.3.2 Khảnăng tổng hợp protease của các chủng 3, 8, 12, 16,

26.2 trên môi trường tăng sinh protease .50

3.2 Định danh vi khuẩn.51

3.3 Khảo sát một sốyếu tố ảnh hưởng đến hoạt độamylase, protease

của chủng 8 (Bacillus subtilis) khi nuôi cấy trên môi trường lỏng.52

3.3.1 pH .52

3.3.1.1 Ảnh hưởng của pH môi trường nuôi cấy đến hoạt độamylase.52

3.3.1.2 Ảnh hưởng của pH môi trường nuôi cấy đến hoạt độprotease .53

3.3.2 Cơchất.53

3.3.2.1 Ảnh hưởng của cơchất lên hoạt độamylase.53

3.3.2.2 Ảnh hưởng của cơchất lên hoạt độprotease.54

3.3.3. Mật độvi khuẩn .55

3.3.3.1. Ảnh hưởng của mật độgiống lên hoạt độamylase .55

3.3.3.2. Ảnh hưởng của mật độgiống lên hoạt độprotease .56

3.3.4 Thời gian nuôi cấy .57

3.3.4.1 Khảo sát hoạt độamylase theo thời gian nuôi cấy trên

môi trường lỏng .57

3.3.4.2 Khảo sát hoạt độprotease theo thời gian nuôi cấy trên

môi trường lỏng .58

3.4 Khảo sát sơbộkhảnăng tác dụng của chủng 8 lên môi trường

nước ao nuôi cá Tra.59

3.4.1 Khảnăng tác dụng lên pH môi trường .59

3.4.2 Khảnăng tác dụng lên tổng Carbon hữu cơ(TOC) theo thời gian .60

3.4.3 Khảnăng tác dụng lên tổng NH3.62

3.4.4 Khảnăng tác dụng lên tổng chất rắn lơlửng(TSS) theo thời gian .63

3.4.5 khảnăng tác dụng lên tổng lượng vi sinh vật hiếu khí.64

PHẦN 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀNGHỊ.67

4.1 Kết luận .67

4.2 Đềnghị.68

TÀI LIỆU THAM KHẢO.69

PHỤLỤC