Luận văn Khảo sát khả năng ức chế virus herpes simplex của diterpen lacton từ cây xuyên tâm liên
MỤC LỤC 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU.12 1.1 GIỚI THIỆU VỀCÂY XUYÊN TÂM LIÊN. 3 1.1.1 Mô tảthực vật .3 1.1.2 Phân bố.4 1.1.3 Sinh thái, trồng trọt và thu hoạch.4 1.1.4 Thành phần hóa học .5 1.1.5 Tác dụng dược lý .7 1.1.6 Một sốnghiên cứu vềchiết xuất và định lượng diterpen lacton trong Xuyên tâm liên trong nước và trên thếgiới.9 1.2 SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO. 11 1.2.1 Định nghĩa.11 1.2.2 Ứng dụng của HPLC trong định tính dược liệu.11 1.2.3 Chất đối chiếu .12 1.2.4 Thẩm định quy trình phân tích.13 1.3 GIỚI THIỆU HERPES SIMPLEX VIRUS. 16 1.3.1 Phân loại .16 1.3.2 Đặc điểm-hình thái-cấu tạo.16 1.3.3 Sựsinh sôi của HSV-2.18 1.3.4 Quá trình phiên mã và biểu hiện gen .20 1.3.5 Sựbiểu hiện bệnh .21 1.3.6 Chẩn đoán Herpes simplex virus .21 1.3.7 Phòng bệnh và điều trị.23 1.3.8 Phương pháp nghiên cứu tác nhân có tác dụng kháng HSV.24 2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .28 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU.28 2.1.1 Dược liệu.28 2.1.2 Vật liệu sinh học .28 2.2 HÓA CHẤT, MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY .28 2.2.1 Hóa chất chiết xuất và kiểm tra dược liệu .28 2.2.2 Hóa chất thửhoạt tính kháng virus.29 2.3 DỤNG CỤVÀ THIẾT BỊ.30 2.3.1 Dụng cụthiết bịtrong chiết xuất dược liệu .30 2.3.2 Thiết bịphân tích .31 2.3.3 Dụng cụthiết bịthực hiện phản ứng sinh học .31 2.4 PHƯƠNG PHÁP CHIẾT XUẤT VÀ PHÂN LẬP CÁC DITERPEN LACTON TỪXUYÊN TÂM LIÊN .32 2.4.1 Chiết xuất diterpen toàn phần từXuyên tâm liên .32 2.4.2 Phân lập 3 diterpen lacton chính từcao chiết Xuyên tâm liên .33 2.4.3 Xác định lý hóa tính, các phổnghiệm của 3 diterpen lacton phân lập được . .34 2.5 XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG 3 DITERPEN LACTON BẰNG HPLC .34 2.5.1 Khảo sát tính tương thích hệthống.35 2.5.2 Thẩm định quy trình định lượng.35 2.5.3 Xửlý thống kê .36 2.5.4 Áp dụng quy trình đã xây dựng để định lượng diterpen lacton trong dược liệu ban đầu và mẫu cao loại màu của Xuyên tâm liên .36 2.6 QUY TRÌNH THỬHOẠT TÍNH KHÁNG VIRUS HERPES SIMPLEX (HSV) CỦA CAO CHIẾT XUYÊN TÂM LIÊN VÀ 3 DITERPEN LACTON .37 2.6.1 Nuôi cấy tếbào .37 2.6.2 Phương pháp đếm tếbào.38 2.6.3 Tạo nguồn HSV chuẩn.39 2.6.4 Xác định TCID50của hỗn dịch virus .39 2.6.5 Chuẩn bịdịch thử.41 2.6.6 Phương pháp nhuộm tếbào bằng xanh methylen.41 2.6.7 Phương pháp thửnghiệm độc tính tếbào (Cytotoxicity assay).42 2.6.8 Phương pháp thửnghiệm hoạt tính kháng virus (Antivirus assay) .43 2.6.9 Tính chỉsốchọn lọc SI (hệsốtrịliệu SI) .44 3 KẾT QUẢVÀ BIỆN LUẬN . 37 3.1 CHIẾT XUẤT DITERPEN LACTON TOÀN PHẦN TỬLÁ XUYÊN TÂM LIÊN . 45 3.2 PHÂN LẬP 3 DITERPEN LACTON CHÍNH TỪCAO CHIẾT XTL. 46 3.2.1 Phân lập A1.46 3.2.2 Phân lập A2và A3.48 3.3 XÁC ĐỊNH LÝ HÓA TÍNH VÀ CÁC PHỔNGHIỆM CỦA 3 DITERPEN LACTON PHÂN LẬP ĐƯỢC . 49 3.3.1 Cảm quan .49 3.3.2 Phản ứng hóa học.50 3.3.3 Điểm nóng chảy .50 3.3.4 Sắc ký lớp mỏng .51 3.3.5 Sắc ký lỏng hiệu năng cao .52 3.3.6 Phổtửngoại .55 3.3.7 Phổhồng ngoại .56 3.3.8 Phổkhối (MS).57 3.3.9 Phổproton NMR (1H-NMR).57 3.3.10 Phổcarbon 13 NMR (13C-NMR).58 3.4 XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG. 60 3.4.1 Thăm dò điều kiện tách 3 diterpen lacton trên HPLC .60 3.4.2 Xây dựng quy trình định lượng .61 3.4.3 Khảo sát tính tương thích hệthống.63 3.4.4 Thẩm định quy trình định lượng.66 3.4.5 Quy trình định lượng andrographolid, dehydroandrographolid và neoandrographolid trong dược liệu Xuyên tâm liên bằng HPLC .72 3.4.6 Áp dụng quy trình đã xây dựng để định lượng 3 diterpen lacton chính trong bột lá Xuyên tâm liên và cao chiết loại màu .73 3.5 KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG HSV-1 VÀ HSV-2 CỦA CAO VÀ CÁC CHẤT TINH KHIẾT . 74 3.5.1 Xác định hiệu giá virus theo TCID50.74 3.5.2 Khảo sát độ độc của cao chiết và chất tinh khiết trên tếbào Vero .75 3.5.3 Khảnăng ức chếHSV-1 và HSV-2 của cao chiết và chất tinh khiết trên tếbào Vero .80 3.5.4 So sánh khảnăng ức chếvirus của cao chiết và các chất tinh khiết.89 KẾT LUẬN VÀ ĐỀNGHỊ. 92
Các file đính kèm theo tài liệu này:
- 6.pdf
- 1.pdf
- 2.pdf
- 3.pdf
- 4.pdf
- 5.pdf
- 7.pdf
- 8.pdf
- 9.pdf
- 10.pdf
- 11.pdf
- 12.pdf