Luận văn Nghiên cứu chế tạo Kit thử nhanh trong phân tích Urea

MỤC LỤC

ĐỀ MỤC: Trang

TRANG BÌA . i

LỜI CẢM ƠN . ii

MỤC LỤC. iii

DANH SÁCH HÌNH VẼ . vii

DANH SÁCH BẢNG BIỂU. ix

LỜI MỞ ĐẦU . 1

CHƯƠNG 1 . 2

1.1. Enzyme urease (EC 3.5.1.5) . 3

1.1.1. Danh pháp quốc tế và phân loại . 3

1.1.2. Tính chất vật lý của enzyme urease . 3

1.1.3. Tính chất hóa lý của enzyme urease . 6

1.1.4. Trung tâm hoạt động . 6

1.1.5. Cơ chế xúc tác . 9

1.1.6. Cơ chất của urease. 10

1.1.7. Các yếu tố ảnh hưởng đến vận tốc phản ứng của urease . 12

1.2. Các phương pháp thu nhận urease . 23

1.2.1. Nguồn thu nhận . 23

1.2.2. Một số phương pháp tách chiết và tinh chế enzyme . 26

1.3. Các phương pháp xác định hoạt tính urease . 27

1.3.1. Xác định hoạt tính urease dựa trên việc định lượng NH3được giải phóng. 29

1.3.2. Xác định hoạt tính urease bằng cách định lượng CO2được giải phóng . 30

1.4. Ứng dụng của enzyme urease . 31

1.4.1. Trong nông nghiệp . 31

1.4.2. Trong thực phẩm . 31

1.4.3. Trong phân tích hóa sinh . 31

1.4.4. Trong công nghệ môi trường . 32

1.4.5. Trong y học . 32

1.5. Tổng quan về urea . 32

1.5.1. Cấu tạo hóa học của urea. 32

1.5.2. Phát hiện . 33

1.5.3. Công dụng . 34

1.5.4. Mức độ nguy hiểm. 35

1.5.5. Các nguồn phát sinh urea . 35

1.5.6. Các phương pháp xác định urea . 39

1.6. Kit thử nhanh trong phân tích urea . 46

1.6.1. Tình hình các loại kit thử nhanh ở Việt Nam [52] . 46

1.6.2. Các loại kit phân tích urea . 47

CHƯƠNG 2 . 50

2.1. Nguyên liệu. 51

2.1.1. Hóa chất . 51

2.1.2. Dụng cụ . 51

2.2. Phương pháp nghiên cứu . 52

2.2.1. Sơ đồ nghiên cứu . 52

2.2.2. Phương pháp tìm chất chỉ thị màu tối ưu . 52

2.2.3. Phương pháp xác dịnh lượng chất chỉ thị thích hợp cho lên kit . 54

2.2.4. Phương pháp chọn dung môi thích hợp dùng để pha urease. 54

2.2.5. Phương pháp chọn thể tích chấm enzyme phù hợp . 58

2.2.6. Phương pháp nghiên cứu lượng enzyme urease thích hợp cho lên kit . 59

2.2.7. Phương pháp khảo sát giới hạn phát hiện của kit, xây dựng thang màu bán định

lượng urea và đường chuẩn ?pH. 60

2.2.8. Phương pháp xác định thời gian hiện màu của kit . 60

2.2.9. Phương pháp xác định thời gian sử dụng của kit . 60

2.2.10. Khảo sát khả năng phát hiện của kit trong mẫu thực. 61

2.2.11. Các phương pháp xử lý số liệu. 61

CHƯƠNG 3 . 62

3.1. Khảo sát các loại chất chỉ thị màu . 63

3.2. Khảo sát lượng chất chỉ thị thích hợp cho lên kit . 65

3.3. Khảo sát dung môi pha urease . 68

3.3.1. Khảo sát hoạt tính của enzyme urease theo phương pháp Nessler . 68

3.3.2. Khảo sát dung môi dùng để pha urease . 70

3.4. Khảo sát lượng enzyme thích hợp cho lên kit . 72

3.4.1. Khảo sát thể tích chấm enzyme urease lên kit. 72

3.4.2. Khảo sát nồng độ dung dịch enzyme urease cho lên kit. 72

3.5. Khảo sát giới hạn phát hiện của kit, xây dựng thang màu bán định lượng urea và đường

chuẩn ?pH. 76

3.5.1. Xác định khả năng phát hiện của kit . 76

3.5.2. Xây dựng thang màu bán định lượng urea. 77

3.5.3. Xây dựng đường chuẩn ?pH để định lượng urea . 78

3.6. Khảo sát thời gian hiện màu của kit . 83

3.7. Khảo sát thời gian sử dụng của kit . 85

3.8. Khảo sát khả năng phát hiện của kit trong mẫu thực. 87

3.8.1. Sữa . 87

3.8.2. Nước mắm . 89

3.8.3. Thủy sản . 90

CHƯƠNG 4 . 95

4.1. Kết luận . 96

4.2. Kiến nghị: . 97

TÀI LIỆU THAM KHẢO. 98