Luận văn Phân lập promoter của gen mã hóa cho enzyme cinnamyl alcohol dehydrogenase (CAD) và thiết kế vector chuyển gen mang gen mã hóa cho enzyme cinnamoyl coA reductase (CCR) từ cây bạch đàn urô (Eucalyptus urophylla S.T. Blake)

MỤC LỤC

MỞ ĐẦU

CHưƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU .

1.1. Tổng quan về cây bạch đàn .

1.2. Tình hình trồng bạch đàn ở Việt Nam .

1.3. Tình hình sinh trưởng của cây bạch đàn ở Việt Nam .

1.4. Lignin và chu trình sinh tổng hợp lignin ở thực vật .

1.4.1. Lignin .

1.4.2. Chu trình sinh tổng hợp lignin ở thực vật .

1.4.3. Giới thiệu về gen mã hóa cho enzyme cinnamyl alcohol dehydrogenase (CAD)

1.5. Tổng quan về promoter .

1.5.1. Mô hình điều hoà biểu hiện gen ở sinh vật nhân chuẩn. .

1.5.2. Cấu trúc và chức năng của promoter .

1.5.3. Các loại promoter sử dụng trong công nghệ sinh học .

1.5.4. Promoter điểu khiển hoạt động gen ở tầng xylem

1.5. Một số kỹ thuật sinh học phân tử ứng dụng trong nghiên cứu

CHưƠNG 2. VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .

2.1. Vật liệu nghiên cứu .

2.1.1. Vật liệu: .

2.1.2. Hoá chất: .

2.1.3. Máy móc, thiết bị .

2.1.4. Địa điểm nghiên cứu

2.2. Phương pháp nghiên cứu .

2.2.1. Phương pháp tìm kiếm thông tin về trình tự gen mã hóa cho enzyme

CAD trên ngân hàng gen quốc tế .

2.2.2. Thiết kế mồi đặc hiệu tách dòng gen/promoter. .

2.2.3. Tách chiết và tinh sạch DNA – RNA từ mô gỗ .

2.3.4. Tổng hợp cDNA

2.2.5. Khuếch đại đoạn promoter EuCAD và đoạn gen CCR bằng phản ứng PCR .

2.2.6. Phương pháp tách dòng .

2.2.7. Phương pháp PCR trực tiếp từ khuẩn lạc (colony-PCR)

2.2.8. Phương pháp xác định trình tự của gen. .

2.2.9. Phương pháp Gateway. .

CHưƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .

3.1. Tách chiết DNA bạch đàn.

3.2. Khuếch đại promoter bằng PCR .

3.3. Tách dòng và xác định trình tự đoạn promoter EuCAD .

3.3.1. Tinh sạch sản phẩ m PCR và tạo vector tái tổ hợp .

3.3.2. Biến nạp sản phẩm ligation vào tế bào vi khuẩn E.coli DH5. .

3.3.3. Chọn dòng tế bào E.coli mang vector tái tổ hợp. .

3.3.4. Tách chiết plasmid tái tổ hợp .

3.3.5. Kết quả đọc trình tự nucleotide của hai đoạn promoter CAD1 và CAD2.

3.3.6. Phân tích các nhân tố điều hòa dạng cis có mặt trong trình tự của promoter gen CAD tách dòng được từ bạch đàn nâu Eucalyptus urophylla S.T Blake. .

3.3.7. Kết quả đăng tải trình tự promoter của gen mã hóa cho enzyme cinnamyl

alcohol dehydrogenase tại ngân hàng gen quốc tế NCBI .

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .

TÀI LIỆU THAM KHẢO