Luận án Nghiên cứu tổng hợp, thiét lập chất chuẩn và tạp chuẩn dùng trong kiểm nghiệm terazosin

a I C T đ ư ợ c x á c đ ị n h b ằ n g p h ư ơ n g p h á p H P L C v ớ i d e t e c t o r đ o đ ộ d ẫ n . Đ â y l à p h ư ơ n g p h á p t h a m k h ả o T C V N [ 1 ] c ó s ử d ụ n g d u n g d ị c h c h u ẩ n g ố c C l" n ồ n g đ ộ 1 0 0 0 p p m ( l ô H C 6 8 8 1 0 4 9 7 , M e r c k ) đ ể x á c đ ị n h h à m l ư ợ n g i o n C l" t r o n g d u n g d ị c h s ả n p h ẩ m , t ừ đ ó t í n h r a t ỷ l ệ m o l H C l k ế t h ợ p t r o n g p h â n t ử I C T đ ú n g l à 2 p h â n t ử H C l c ó t r o n g 1 p h â n t ử I C T . P h ư ơ n g p h á p n à y c h o k ế t q u ả t i n c ậ y v ớ i g i á t r ị R S D c ủ a c á c k ế t q u ả n h ỏ h ơ n 1 % ( 0 , 3 2 % ) , ( H ì n h 3 . 1 8 , B ả n g 3 . 1 1 ) , k ế t h ợ p v ớ i c á c p h ư ơ n g p h á p p h ổ đ ể x á c đ ị n h đ ú n g c ấ u t r ú c c ủ a I C T l à d ạ n g m u ố i k ế t h ợ p 2 . H C l . K ế t q u ả n à y b ổ s u n g c h o k ế t q u ả p h â n t í c h p h ổ N M R c ủ a 135 I C T v ì c á c p r o t o n - N H c ủ a H C l k ế t h ợ p k h ô n g p h á t h i ệ n đ ư ợ c t r ê n p h ổ 1H - N M R n h ư s ả n p h ẩ m I A T v à T E Z . V ớ i đ ặ c đ i ể m I C T l à c h ấ t r ấ t k h ó t a n n g a y c ả D M S O - J ó l à d u n g m ô i c ó k h ả n ă n g t a n t ố t n h ấ t t r o n g s ố c á c d u n g m ô i đ o p h ổ N M R đ ã k h ả o s á t n h ư n g I C T c ũ n g v ẫ n r ấ t k h ó t a n . Đ ể t ă n g đ ộ t a n c ủ a I C T p h ả i s ử d ụ n g m á y c ộ n g h ư ở n g t ừ h ạ t n h â n B r u k e r A V A N C E 5 0 0 M H z ( T h ụ y S ĩ ) c ó b ộ p h ậ n g i a n h i ệ t c h o d u n g d ị c h đ o v à t i ế n h à n h đ o ở 6 0 ° C m ớ i c ó t h ể đ o đ ư ợ c c á c p h ổ 1H - N M R , 13C - N M R v à c á c p h ổ 2 c h i ề u c ủ a I C T c h o c á c t í n h i ệ u r õ r à n g . N h ư v ậ y , t h ô n g q u a p h â n t í c h p h ổ I R , M S , 1H - N M R , 13C - N M R , H S Q C , H M B C v à p h ư ơ n g p h á p H P L C v ớ i d e t e c t o r đ o đ ộ d ẫ n c ó t h ể k h ẳ n g đ ị n h c h ắ c c h ắ n c ấ u t r ú c c ủ a s ả n p h ẩ m I C T l à p h ù h ợ p v ớ i l ý t h u y ế t 4.3. VỀ VIỆC XÂY DựNG TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG CHO CÁC NGUYÊN LIỆU THIẾT LẬP CHUẨN 4.3.1. Về tiêu chuẩn chất lượng của các sản phẩm Q u á t r ì n h t h i ế t l ậ p c h ấ t c h u ẩ n v à t ạ p c h u ẩ n c ầ n p h ả i c ó c á c p h ư ơ n g p h á p p h â n t í c h t i n c ậ y đ ể k i ể m t r a c h ấ t l ư ợ n g n g u y ê n l i ệ u d ự k i ế n s ử d ụ n g t h i ế t l ậ p c h u ẩ n c ũ n g n h ư đ á n h g i á đ ộ đ ồ n g n h ấ t , k i ể m t r a t h à n h p h ẩ m v à đ á n h g i á đ ộ ổ n đ ị n h c ủ a s ả n p h ẩ m . C á c t i ê u c h u ẩ n c h ấ t l ư ợ n g c ủ a c á c n g u y ê n l i ệ u t ổ n g h ợ p đ ư ợ c v ớ i c á c p h ư ơ n g p h á p t h ử d o l u ậ n á n x â y d ự n g ( P h ụ l ụ c 1 4 , P h ụ l ụ c 1 5 , P h ụ l ụ c 1 6 , P h ụ l ụ c 1 7 ) đ ã đ ư ợ c s ử d ụ n g đ ể s o ạ n t h ả o c á c t h ư ờ n g q u y k ỹ t h u ậ t t h i ế t l ậ p c h u ẩ n c h o c h ấ t c h u ẩ n T E Z v à c á c t ạ p c h u ẩ n I A T , I B T , I C T ( P h ụ l ụ c 1 8 , P h ụ l ụ c 1 9 , P h ụ l ụ c 2 0 , P h ụ l ụ c 2 1 ) m à đ ư ợ c V K N T T Ư p h ê d u y ệ t ; t ừ đ ó đ ã đ ư ợ c ứ n g d ụ n g đ ể k i ể m t r a c h ấ t l ư ợ n g n g u y ê n l i ệ u T E Z , I A T , I B T , I C T t r ư ớ c k h i t h i ế t l ậ p c h u ẩ n c ũ n g n h ư đ á n h g i á đ ộ đ ồ n g n h ấ t , k i ể m t r a c h ấ t l ư ợ n g v à đ á n h g i á đ ộ ổ n đ ị n h c ủ a c á c s ả n p h ẩ m c h ấ t c h u ẩ n , t ạ p c h u ẩ n t h i ế t l ậ p đ ư ợ c . C á c p h ư ơ n g p h á p t h ử t r o n g c á c t i ê u c h u ẩ n c h ấ t l ư ợ n g đ ề u l à c á c p h ư ơ n g p h á p c h í n h t h ố n g t r o n g c á c d ư ợ c đ i ể n q u ố c t ế v à V i ệ t N a m - V ề t i ê u c h u ẩ n c h ấ t l ư ợ n g c h o n g u y ê n l i ệ u T E Z C á c c h ỉ t i ê u c h ấ t l ư ợ n g c h o s ả n p h ẩ m T E Z đ ư ợ c x â y d ự n g t h e o c á c c h ỉ t i ê u c h ấ t l ư ợ n g c ủ a T E Z t r o n g U S P 4 0 [ 9 0 ] v à B P 2 0 1 7 [ 8 9 ] g ồ m c á c c h ỉ t i ê u : M ô t ả , đ ộ t r o n g v à m à u s ắ c d u n g d ị c h , đ ị n h t í n h , m ấ t k h ố i l ư ợ n g d o l à m k h ô , t ạ p a c i d t e t r a h y d r o - 2 - f u r a n c a r b o x y l i c ( T H F A ) , t ạ p 1 - [ ( t e t r a h y d r o - 2 - f u r a n y l ) c a r b o n y l ] p i p e r a z i n ( T F C P ) , t ạ p c h ấ t l i ê n q u a n , đ ị n h l ư ợ n g . T r o n g s ố c á c c h ỉ t i ê u n à y , c á c c h ỉ t i ê u đ ộ t r o n g v à m à u s ắ c d u n g d ị c h , đ ị n h t í n h , t ạ p a c i d t e t r a h y d r o - 2 - f u r a n c a r b o x y l i c , đ ị n h l ư ợ n g đ ư ợ c x â y d ự n g t h e o c h u y ê n l u ậ n n g u y ê n l i ệ u T E Z t r o n g U S P 4 0 . C h ỉ t i ê u m ấ t k h ố i l ư ợ n g d o l à m k h ô x â y d ự n g b ằ n g p h ư ơ n g p h á p T G A đ ể t i ế t k i ệ m n g u y ê n l i ệ u k h i t h ử n g h i ệ m 136 v à p h ù h ợ p v ớ i n g u y ê n l i ệ u T E Z t i n h c h ế đ ư ợ c l à d ạ n g t e r a z o s i n k h a n . C h ỉ t i ê u t ạ p T F C P k h i t i ế n h à n h t h e o đ ú n g c á c đ i ề u k i ệ n c ủ a U S P 4 0 m ặ c d ù đ ã k h ả o s á t n h i ề u c ộ t C 8 k h á c n h a u h i ệ n c ó t ạ i V K N T T Ư v à t h a y đ ổ i c á c m á y H P L C k h á c n h a u n h ư n g k h i t i ế n h à n h t h e o U S P 4 0 v ẫ n k h ô n g k h ả t h i v ì v ậ y đ ể x á c đ ị n h t ạ p n à y l u ậ n á n đ ã á p d ụ n g p h ư ơ n g p h á p H P L C x á c đ ị n h t ạ p N t r o n g B P 2 0 1 7 v ì t ạ p T F C P t h e o U S P c h í n h l à t ạ p N c ủ a t e r a z o s i n t h e o B P . C á c c h ỉ t i ê u v à c á c p h ư ơ n g p h á p p h á p t h ử đ ư ợ c x â y d ự n g h o à n t o à n t h e o U S P 4 0 v à B P 2 0 1 7 l à 2 d ư ợ c đ i ể n t h a m c h i ế u n ê n t h e o q u i đ ị n h k h ô n g y ê u c ầ u t h ẩ m đ ị n h p h ư ơ n g p h á p p h â n t í c h . - V ề t i ê u c h u ẩ n c h ấ t l ư ợ n g c h o c á c s ả n p h ẩ m I A T , I B T , I C T T i ê u c h ấ t l ư ợ n g c h o s ả n p h ẩ m I A T , I B T , I C T đ ư ợ c x â y d ự n g q u a q u á t r ì n h k h ả o s á t t h ự c t ế d ự a t r ê n đ ặ c đ i ể m v ậ t l ý , h ó a h ọ c c ủ a I A T g ồ m c á c c h ỉ t i ê u : M ô t ả , đ ị n h t í n h , đ i ể m c h ả y , m ấ t k h ố i l ư ợ n g d o l à m k h ô , t ạ p c h ấ t l i ê n q u a n , đ ị n h l ư ợ n g . T r o n g đ ó c h ỉ t i ê u đ ị n h t í n h đ ư ợ c t h ự c h i ệ n b ằ n g p h ư ơ n g p h á p đ o p h ổ I R , T L C , H P L C v à p h ả n ứ n g h ó a h ọ c t r o n g ố n g n g h i ệ m . C h ỉ t i ê u m ấ t k h ố i l ư ợ n g d o l à m k h ô đ ư ợ c t h ự c h i ệ n b ằ n g p h ư ơ n g p h á p T G A , c h ỉ t i ê u t ạ p c h ấ t l i ê n q u a n v à đ ị n h l ư ợ n g đ ư ợ c t h ự c h i ệ n b ằ n g p h ư ơ n g p h á p H P L C . 4.3.2. Bàn luận chung về phương pháp phân tích các sản phẩm IAT, IBT, ICT C á c p h ư ơ n g p h á p T L C v à H P L C m à l u ậ n á n x â y d ự n g đ ể đ ị n h t í n h , đ ị n h l ư ợ n g v à p h â n t í c h t ạ p c h ấ t t r o n g c á c n g u y ê n l i ệ u t ạ p c h ấ t t ổ n g h ợ p đ ư ợ c ( I A T , I B T , I C T ) c h ư a đ ư ợ c c ô n g b ố t r o n g t à i l i ệ u n à o v à đ ề u l à c á c p h ư ơ n g p h á p đ ơ n g i ả n ; s ử d ụ n g c á c h ó a c h ấ t , d u n g m ô i r ẻ t i ề n , d ễ k i ế m ; c á c t h a o t á c d ễ d à n g t h ự c h i ệ n v ớ i c á c t r a n g t h i ế t b ị s ẵ n c ó t ạ i h ầ u h ế t c á c p h ò n g k i ể m n g h i ệ m t r o n g n ư ớ c . Đ ố i v ớ i t ừ n g s ả n p h ẩ m , k h i x â y d ự n g p h ư ơ n g p h á p p h â n t í c h b ằ n g T L C h a y H P L C đ ề u đ ư a r a d u n g d ị c h p h â n g i ả i đ ể đ á n h g i á đ ộ đ ặ c h i ệ u m à t h à n h p h ầ n c á c c h ấ t t r o n g c á c d u n g d ị c h p h â n g i ả i c h o p h ư ơ n g p h á p T L C v à H P L C t ư ơ n g t ự n h a u . D u n g d ị c h p h â n g i ả i l u ô n c ó 1 t h à n h p h ầ n l à c h í n h h o ạ t c h ấ t t e r a z o s i n c ò n c á c t h à n h p h ầ n k h á c đ ư ợ c l ự a c h ọ n t r ê n c ơ s ở c á c t h à n h p h ầ n đ ó t h a m g i a v à o q u á t r ì n h t ổ n g h ợ p c á c s ả n p h ẩ m n à y h o ặ c c ó t h ể l à c h í n h c á c t ạ p đ ị n h d a n h c ủ a c á c s ả n p h ẩ m n à y . C á c p h ư ơ n g p h á p T L C v à H P L C đ ã đ ư ợ c t h ẩ m đ ị n h t h e o đ ú n g q u y đ ị n h t r o n g c á c t à i l i ệ u c h í n h t h ố n g n h ư h ư ớ n g d ẫ n c ủ a A S E A N , I C H , U S P [ 3 9 ] , [ 5 4 ] , [ 9 2 ] , [ 9 4 ] . K ế t q u ả t h ẩ m đ ị n h c h o t h ấ y c á c p h ư ơ n g p h á p T L C c ó đ ộ đ ặ c h i ệ u c a o . C á c p h ư ơ n g p h á p H P L C đ ể đ ị n h l ư ợ n g s ả n p h ẩ m đ ề u c ó đ ộ đ ặ c h i ệ u c a o , đ ộ l ặ p l ạ i , đ ộ đ ú n g t ố t v à c ó s ự t ư ơ n g q u a n t u y ế n t í n h c h ặ t c h ẽ g i ữ a n ồ n g đ ộ v à d i ệ n t í c h p i c t r o n g k h o ả n g n ồ n g đ ộ k h ả o s á t , n g o à i r a c á c d u n g d ị c h c h u ẩ n v à t h ử d ù n g c h o c á c p h é p t h ử đ ị n h 137 l ư ợ n g c á c s ả n p h ẩ m đ ề u ổ n đ ị n h t r o n g v ò n g 2 4 g i ờ t ạ o t h u ậ n l ợ i c h o q u á t r ì n h p h â n t í c h . C á c p h ư ơ n g p h á p x á c đ ị n h g i ớ i h ạ n t ạ p c h ấ t k h ô n g đ ị n h d a n h đ ề u c ó đ ộ đ ặ c h i ệ u c a o v à L O D t h ấ p ; c á c p h ư ơ n g p h á p đ ị n h l ư ợ n g t ạ p c h ấ t đ ị n h d a n h n g o à i đ ộ đ ặ c h i ệ u c a o , L O D t h ấ p c ò n c ó đ ộ l ặ p l ạ i , đ ộ đ ú n g t ố t v à c ó s ự t ư ơ n g q u a n t u y ế n t í n h c h ặ t c h ẽ g i ữ a n ồ n g đ ộ v à d i ệ n t í c h p i c t r o n g k h o ả n g n ồ n g đ ộ k h ả o s á t . V ớ i c á c p h ư ơ n g p h á p H P L C đ ể đ ị n h t í n h , đ ị n h l ư ợ n g v à x á c đ ị n h t ạ p c h ấ t t r o n g c á c s ả n p h ẩ m I A T , I B T , I C T l u ậ n á n đ ề u đ ư a r a c á c y ê u c ầ u v ề t í n h t h í c h h ợ p c ủ a h ệ t h ố n g s ắ c k ý p h ù h ợ p v ớ i t ừ n g n g u y ê n l i ệ u t r ê n c ơ s ở k ế t q u ả t h ự c t ế k h i l à m t h ự c n g h i ệ m c ó s ự p h ù h ợ p v ớ i y ê u c ầ u c ủ a p h ư ơ n g p h á p H P L C n ó i c h u n g h o ặ c p h ù h ợ p v ớ i T L T K . C á c t i ê u c h í đ á n h g i á t í n h t h í c h h ợ p c ủ a h ệ t h ố n g s ắ c k ý c h o m ỗ i p h ư ơ n g p h á p H P L C đ ề u b a o g ồ m : g i á t r ị R S D c ủ a d i ệ n t í c h p i c v à t h ờ i g i a n l ư u , s ố đ ĩ a l ý t h u y ế t , h ệ s ố đ ố i x ứ n g p i c s ắ c k ý , đ ộ p h â n g i ả i g i ữ a c á c p i c s ắ c k ý t r ê n s ắ c k ý đ ồ c ủ a c á c d u n g d ị c h p h â n g i ả i . C á c p h ư ơ n g p h á p đ ị n h l ư ợ n g đ ề u t i ế n h à n h s o n g s o n g v ớ i c á c t ạ p c h u ẩ n U S P R S c h o k ế t q u ả đ ị n h l ư ợ n g c h í n h x á c h ơ n k h i đ ị n h l ư ợ n g b ằ n g p h ư ơ n g p h á p c h u ẩ n h ó a d i ệ n t í c h k h ô n g s ử d ụ n g c h ấ t c h u ẩ n n h ư t r o n g m ộ t s ố t à i l i ệ u t h a m k h ả o [ 1 0 6 ] , [ 1 0 7 ] , [ 1 0 8 ] . Đ ộ đ ặ c h i ệ u c ủ a p h ư ơ n g p h á p đ ị n h l ư ợ n g H P L C đ ư ợ c đ á n h g i á d ự a t r ê n b ố n t i ê u c h í : S ự t ư ơ n g ứ n g v ề t h ờ i g i a n l ư u g i ữ a p i c c h u ẩ n v à p i c t h ử , h ệ s ố t i n h k h i ế t p i c , h ệ s ố c h ồ n g p h ổ U V c ủ a p i c t h ử v à p i c c h u ẩ n v à đ ộ p h â n g i ả i g i ữ a c á c p i c t r o n g s ắ c k ý đ ồ c ủ a d u n g d ị c h p h â n g i ả i . Đ ộ đ ặ c h i ệ u c ủ a c á c p h ư ơ n g p h á p p h â n t í c h t ạ p c h ấ t n g o à i v i ệ c đ á n h g i á t r ê n m ẫ u t r ắ n g v à m ẫ u t h ử c ò n đ á n h g i á t r ê n c á c d u n g d ị c h t h ử đ ư ợ c p h â n h ủ y t r o n g c á c đ i ề u k i ệ n h ó a l ý k h á c n h a u n h ư U V , n h i ệ t đ ộ , a c i d , b a z ơ , o x i h ó a k ế t q u ả c á c p i c t ạ p m ớ i x u ấ t h i ệ n t á c h h o à n t o à n k h ỏ i p i c c h í n h v à t á c h k h ỏ i n h a u h o à n t o à n v ớ i đ ộ p h â n g i ả i g i ữ a c á c p i c l i ề n k ề đ ề u l ớ n h ơ n 1 ,5 ( B ả n g 3 . 1 9 , B ả n g 3 . 1 9 2 7 , B ả n g 4 1 ) . 4.3.3. Về xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho nguyên liệu tạp A V ề p h ư ơ n g p h á p đ ị n h t í n h n g u y ê n l i ệ u I A T b ằ n g T L C Đ ể x â y d ự n g đ ư ợ c p h ư ơ n g p h á p đ ị n h t í n h I A T b ằ n g T L C , 9 h ệ p h a đ ộ n g k h á c n h a u đ ã đ ư ợ c k h ả o s á t v ớ i m ụ c t i ê u t ì m đ ư ợ c h ệ p h a đ ộ n g c h o c á c v ế t s ắ c k ý đ ẹ p , g ọ n v à s ắ c k ý đ ồ d u n g d ị c h p h â n g i ả i c h o c á c v ế t I A T , T E Z v à A C D Q t á c h k h ỏ i n h a u h o à n t o à n ( H ì n h 3 . 1 9 ) . D u n g d ị c h p h â n g i ả i g ồ m 3 t h à n h p h ầ n l à I A T , T E Z v à A C D Q t h ì I A T l à t ạ p c h ấ t c ó t r o n g T E Z c ò n A C D Q l à n g u y ê n l i ệ u đ ể t ổ n g h ợ p I A T . C á c c h ấ t n à y c ó n h ữ n g p h ầ n c ấ u t r ú c h ó a h ọ c t ư ơ n g t ự n h a u n ê n v i ệ c c á c v ế t s ắ c k ý t á c h n h a u h o à n t o à n g i ú p k h ẳ n g đ ị n h đ ộ đ ặ c h i ệ u c ủ a p h ư ơ n g p h á p đ ị n h t í n h đ ã x â y d ự n g . N h ậ n t h ấ y c ó t h ể l ự a c h ọ n 1 t r o n g 4 h ệ 1 A , 2 A , 3 A , 4 A , t u y n h i ê n l ự a c h ọ n h ệ 4 A v ì 138 các vết sắc ký đẹp tách xa nhau, có thời gian chạy sắc ký ngắn và không có mùi khó chịu do «-butanol gây ra. Kết quả thẩm định cũng cho thấy phương pháp đạt yêu cầu về độ đặc hiệu (Hình 3.20). V ề p h ư ơ n g p h á p đ ị n h t í n h , đ ị n h l ư ợ n g n g u y ê n l i ệ u I A T b ằ n g H P L C Phương pháp HPLC định tính, định lượng IAT được xây dựng trên cơ sở tham khảo phương pháp xác định tạp chất liên quan trong chuyên luận terazosin của USP 40 và các tài liệu tham khảo khác nhưng đã có sự thay đổi về bản chất của phương pháp và các điều kiện như: nồng độ định lượng, dung môi pha mẫu và bước sóng phát hiện để phù hợp với phương pháp định lượng nguyên liệu IAT và phù hợp với trang thiết bị sẵn có tại phòng thí nghiệm. Phương pháp đã được thẩm định theo đúng các tiêu chí quy định và đều đạt yêu cầu. So với các tài liệu tham khảo phương pháp có một số điểm giống và khác nhau như sau: - v ề b ả n c h ấ t c ủ a p h ư ơ n g p h á p p h â n t í c h : Phương pháp xác định IAT trong USP 40 và các tài liệu tham khảo khác là phương pháp xác định giới hạn tạp chất A trong nguyên liệu chứa terazosin và doxazosin. Còn phương pháp trong luận án là phương pháp định tính, định lượng nguyên liệu IAT tinh khiết. - v ề n ồ n g đ ộ m ẫ u . Nồng độ IAT trong dung dịch phân tích theo phương pháp của USP 40 là cao nhất trong các tài liệu tham khảo nhưng cũng chỉ ở mức 2 ^g/ml, do IAT chỉ là một tạp chất lẫn trong nguyên liệu terazosin. Nồng độ dung dịch tiêm sắc ký phương pháp trong luận án là 15 ^g/ml để đảm bảo phù hợp với một phép định lượng. - v ề d u n g m ô i p h a m ẫ u : Phương pháp trong luận án sử dụng dung môi pha mẫu là pha động, đơn giản hơn so với phương pháp pha mẫu trong USP 40 gồm 3 loại dung môi khác nhau cho 3 giai đoạn pha mẫu. - v ề b ư ớ c s ó n g p h á t h i ệ n : Lựa chọn bước sóng 245 nm làm bước sóng định lượng vì đây là bước sóng mà tại đó IAT có hấp thụ cực đại khi quét phổ dung dịch IAT trong pha động là dung môi pha mẫu khi định lượng (Phụ lục 2). - v ề p h a t ĩ n h : Cột C8 áp dụng theo USP 40 và 1 số TLTK [41], [48], [60], [89], [90]. - v ề t h à n h p h ầ n p h a đ ộ n g và tỷ lệ pha động, nhiệt độ cột và thể tích tiêm mẫu áp dụng theo USP 40. v ề p h ư ơ n g p h á p p h â n t í c h t ạ p c h ấ t l i ê n q u a n t r o n g n g u y ê n l i ệ u I A T b ằ n g H P L C Phương pháp HPLC sử dụng để phân tích tạp chất trong IAT với các điều kiện sắc ký tương tự như phương pháp định lượng IAT mà luận án xây dựng nhưng nồng độ phân tích thay đổi phù hợp với phương pháp phân tích tạp chất trong đó nồng độ dung 139 d ị c h t h ử t ạ p c h ấ t ( 5 0 0 ^ g / m l ) t ă n g l ê n 3 3 l ầ n s o v ớ i n ồ n g đ ộ đ ị n h l ư ợ n g ( 1 5 ^ g / m l ) . D o t r o n g I A T c ó c á c t ạ p k h ô n g đ ị n h d a n h n ê n t h e o q u i đ ị n h c h ỉ c ầ n t i ế n h à n h t h ẩ m đ ị n h đ ộ t h í c h h ợ p h ệ t h ố n g , đ ộ đ ặ c h i ệ u , v à g i ớ i h ạ n p h á t h i ệ n . K ế t q u ả t h ẩ m đ ị n h c h o t h ấ y p h ư ơ n g p h á p c ó đ ộ đ ặ c h i ệ u c a o v à L O D t h ấ p ( 0 , 0 7 9 ^ g / m l ) ( P h ụ l ụ c 8 ) . 4.3.4. Về xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho nguyên liệu tạp B V ề p h ư ơ n g p h á p đ ị n h t í n h n g u y ê n l i ệ u I B T b ằ n g T L C 1 0 h ệ p h a đ ộ n g k h á c n h a u đ ã đ ư ợ c k h ả o s á t v ớ i m ụ c t i ê u t ì m đ ư ợ c h ệ p h a đ ộ n g c h o c á c v ế t s ắ c k ý đ ẹ p , g ọ n v à s ắ c k ý đ ồ d u n g d ị c h p h â n g i ả i c h o c á c v ế t I B T , I A T v à T E Z p h ả i t á c h h o à n t o à n k h ỏ i v ế t n h a u h o à n t o à n , t r o n g đ ó I A T v à T E Z l à 2 t ạ p đ ị n h d a n h c ó t r o n g I B T , T E Z c ò n l à n g u y ê n l i ệ u đ ể t ổ n g h ợ p n ê n I B T . C á c c h ấ t n à y c ó n h ữ n g p h ầ n c ấ u t r ú c h ó a h ọ c t ư ơ n g t ự n h a u n ê n v i ệ c c á c v ế t s ắ c k ý t á c h n h a u h o à n t o à n g i ú p k h ẳ n g đ ị n h đ ộ đ ặ c h i ệ u c ủ a p h ư ơ n g p h á p . N h ậ n t h ấ y c á c h ệ 1 B , 2 B v à 3 B c ó t h ể đ ư ợ c l ự a c h ọ n . T u y n h i ê n h ệ 2 B c h o c á c v ế t s ắ c k í t á c h t ố t n h ấ t n ê n đ ư ợ c l ự a c h ọ n đ ể đ ị n h t í n h I B T . K ế t q u ả t h ẩ m đ ị n h c ũ n g c h o t h ấ y p h ư ơ n g p h á p đ ạ t y ê u c ầ u v ề đ ộ đ ặ c h i ệ u ( H ì n h 3 . 2 6 ) . v ề p h ư ơ n g p h á p đ ị n h t í n h , đ ị n h l ư ợ n g n g u y ê n l i ệ u I B T b ằ n g H P L C P h ư ơ n g p h á p H P L C đ ư ợ c x â y d ự n g t r ê n c ơ s ở t h a m k h ả o p h ư ơ n g p h á p x á c đ ị n h t ạ p c h ấ t l i ê n q u a n t r o n g c h u y ê n l u ậ n t e r a z o s i n c ủ a U S P 4 0 v à c á c t à i l i ệ u t h a m k h ả o k h á c n h ư n g đ ã c ó s ự t h a y đ ổ i v ề b ả n c h ấ t c ủ a p h ư ơ n g p h á p v à c á c đ i ề u k i ệ n n h ư : n ồ n g đ ộ đ ị n h l ư ợ n g , d u n g m ô i p h a m ẫ u v à b ư ớ c s ó n g p h á t h i ệ n đ ể p h ù h ợ p v ớ i p h ư ơ n g p h á p đ ị n h l ư ợ n g n g u y ê n l i ệ u I B T v à p h ù h ợ p v ớ i t r a n g t h i ế t b ị s ẵ n c ó t ạ i p h ò n g t h í n g h i ệ m . T ư ơ n g t ự n h ư p h ư ơ n g p h á p H P L C đ ể đ ị n h l ư ợ n g n g u y ê n l i ệ u I A T , p h ư ơ n g p h á p đ ị n h l ư ợ n g I B T t r o n g l u ậ n á n c ũ n g k h á c s o v ớ i U S P 4 0 v ề b ả n c h ấ t p h ư ơ n g p h á p l à đ ị n h t í n h , đ ị n h l ư ợ n g n g u y ê n l i ệ u I B T t i n h k h i ế t , v ớ i n ồ n g đ ộ đ ị n h l ư ợ n g 5 0 ^ g / m l t r o n g k h i n ồ n g đ ộ I B T t h e o U S P 4 0 l à 2 ^ g / m l , s ử d ụ n g d u n g m ô i p h a m ẫ u l à p h a đ ộ n g , đ ơ n g i ả n h ơ n U S P 4 0 , b ư ớ c s ó n g p h á t h i ệ n 2 4 5 n m l à b ư ớ c s ó n g m à t ạ i đ ó I B T h ấ p t h ụ c ự c đ ạ i k h i q u é t p h ổ d u n g d ị c h I B T t r o n g p h a đ ộ n g l à d u n g m ô i p h a m ẫ u k h i đ ị n h l ư ợ n g ( P h ụ l ụ c 3 ) , c ò n t h ể t í c h t i ê m m ẫ u , p h a t ĩ n h v à n h i ệ t đ ộ p h â n t í c h t ư ơ n g t ự U S P 4 0 . v ề p h ư ơ n g p h á p p h â n t í c h t ạ p c h ấ t l i ê n q u a n t r o n g I B T b ằ n g H P L C P h ư ơ n g p h á p H P L C s ử d ụ n g đ ể p h â n t í c h t ạ p c h ấ t t r o n g I B T v ớ i c á c đ i ề u k i ệ n s ắ c k ý t ư ơ n g t ự n h ư p h ư ơ n g p h á p đ ị n h l ư ợ n g I B T n h ư n g n ồ n g đ ộ n ồ n g đ ộ p h â n t í c h t h a y đ ổ i p h ù h ợ p v ớ i p h ư ơ n g p h á p p h â n t í c h t ạ p c h ấ t t r o n g đ ó n ồ n g đ ộ d u n g d ị c h t h ử t ạ p c h ấ t ( 5 0 0 ^ g / m l ) t ă n g l ê n 1 0 l ầ n s o v ớ i n ồ n g đ ộ đ ị n h l ư ợ n g ( 5 0 ^ g / m l ) . D o t r o n g 140 n g u y ê n l i ệ u I B T c ó c ả t ạ p k h ô n g đ ị n h d a n h v à 2 t ạ p đ ị n h d a n h l à T E Z v à I A T n ê n t h e o q u i đ ị n h t ạ p k h ô n g đ ị n h d a n h đ ã đ ư ợ c t h ẩ m đ ị n h đ ộ t h í c h h ợ p h ệ t h ố n g , đ ộ đ ặ c h i ệ u , v à g i ớ i h ạ n p h á t h i ệ n , c ò n v ớ i 2 t ạ p đ ị n h d a n h l à I A T v à T E Z đ ã đ ư ợ c t h ẩ m đ ị n h đ ầ y đ ủ c á c c h ỉ t i ê u t h ẩ m đ ị n h c ủ a m ộ t p h ư ơ n g p h á p đ ị n h l ư ợ n g t ạ p c h ấ t g ồ m đ ộ t h í c h h ợ p h ệ t h ố n g , đ ộ đ ặ c h i ệ u , L O D , L O Q , đ ộ t u y ế n t í n h , đ ộ đ ú n g , đ ộ l ặ p l ạ i v à đ ộ c h í n h x á c t r u n g g i a n . K ế t q u ả c á c t i ê u c h í t h ẩ m đ ị n h đ ề u đ ạ t y ê u c ầ u . 4.3.5. Về xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho nguyên liệu tạp C v ề p h ư ơ n g p h á p đ ị n h t í n h I C T b ằ n g T L C K h ả o s á t h ệ p h a đ ộ n g đ ể đ ị n h t í n h I C T b ằ n g T L C đ ư ợ c t i ế n h à n h v ớ i 1 0 h ệ d u n g m ô i p h a đ ộ n g k h á c n h a u đ ể l ự a c h ọ n h ệ p h a đ ộ n g c h o c á c v ế t s ắ c k ý đ ẹ p , g ọ n v à s ắ c k ý đ ồ d u n g d ị c h p h â n g i ả i c h o c á c v ế t I C T , I A T , T E Z v à A C D Q t á c h k h ỏ i n h a u h o à n t o à n ( H ì n h 3 . 3 4 ) . D u n g d ị c h p h â n g i ả i g ồ m 4 t h à n h p h ầ n l à I A T , T E Z , A C D Q v à A C D Q t r o n g đ ó I A T v à A C D Q l à n g u y ê n l i ệ u đ ể t ổ n g h ợ p I C T . N h ữ n g c h ấ t n à y đ ề u c ó n h ữ n g p h ầ n c ấ u t r ú c h ó a h ọ c t ư ơ n g t ự n h a u n ê n v i ệ c c á c v ế t s ắ c k ý t á c h n h a u h o à n t o à n g i ú p k h ẳ n g đ ị n h đ ộ đ ặ c h i ệ u c ủ a p h ư ơ n g p h á p đ ị n h t í n h đ ã x â y d ự n g . N h ậ n t h ấ y c ó t h ể l ự a c h ọ n 1 t r o n g 4 h ệ 1 C , 2 C , 3 C , 6 C , t u y n h i ê n l ự a c h ọ n h ệ 1 C v ì c á c v ế t s ắ c k ý đ ẹ p t á c h x a n h a u , c ó t h ờ i g i a n c h ạ y s ắ c k ý n g ắ n v à k h ô n g c ó m ù i k h ó c h ị u d o n - b u t a n o l g â y r a . K ế t q u ả t h ẩ m đ ị n h c ũ n g c h o t h ấ y p h ư ơ n g p h á p đ ạ t y ê u c ầ u v ề đ ộ đ ặ c h i ệ u ( H ì n h 3 . 3 5 ) . K h i c h u ẩ n b ị c á c h ệ d u n g m ô i k h a i t r i ể n 1 C , 2 C đ ể đ ị n h t í n h I C T c ũ n g g i ố n g n h ư h ệ 1 T , 2 T , 3 T d ù n g đ ể k i ể m t r a đ ộ t i n h k h i ế t c ủ a s ả n p h ẩ m T E Z c ó 1 t h a o t á c l ư u ý l à s a u k h i t r ộ n đ ề u c á c t h à n h p h ầ n t r o n g c á c p h a đ ộ n g n à y c ầ n p h ả i l ắ c k ỹ h ỗ n h ợ p đ ể b ã o h ò a N H 3 t r o n g p h a d u n g m ô i s a u đ ó g ạ n l ấ y p h a d u n g m ô i đ ã đ ư ợ c b ã o h ò a N H 3 l à m d u n g m ô i k h a i t r i ể n v ì d u n g d ị c h N H 3 p h â n c ự c k h ô n g đ ồ n g t a n t r o n g h ỗ n h ợ p c á c d u n g m ô i k h ô n g p h â n c ự c c ò n l ạ i t r o n g c á c h ệ d u n g m ô i n à y . L u ậ n á n đ ã đ ư a r a t ỷ l ệ d u n g d ị c h N H 3 x á c đ ị n h c h o m ỗ i h ệ n à y k h i b ã o h ò a d u n g m ô i v ì t h ự c t ế k h i k h ả o s á t n ế u k h ô n g l ư ợ n g h ó a d u n g d ị c h N H 3 t h ì h ệ d u n g m ô i k h a i t r i ể n t h u đ ư ợ c k h ô n g ổ n đ ị n h v à k h i t r i ể n k h a i s ắ c k ý g i á t r ị R f c á c v ế t c ũ n g k h ô n g ổ n đ ị n h . V ớ i đ ặ c đ i ể m I C T r ấ t k h ó t a n d ù đ ã đ ư ợ c h ò a t a n t r o n g m e t h a n o l l à d u n g m ô i m à I C T d ễ t a n n h ấ t t r o n g n h i ề u d u n g m ô i p h a m ẫ u đ ã k h ả o s á t , t u y n h i ê n c h ỉ c ó t h ể p h a đ ư ợ c d u n g d ị c h n ồ n g đ ộ 0 , 0 5 m g / m l ( c h ỉ b ằ n g 1 / 2 0 n ồ n g đ ộ d u n g d ị c h I A T v à I B T d ù n g đ ể đ ị n h t í n h ) . Đ ể đ ả m b ả o l ư ợ n g I C T c h ấ m l ê n b ả n m ỏ n g c h o c á c v ế t c ó t h ể q u a n s á t r õ r à n g p h ù h ợ p v ớ i p h é p t h ử đ ị n h t í n h v à x á c đ ị n h t ạ p c h ấ t , t h ể t í c h c h ấ m s ắ c k ý đ ã l ê n t ớ i 1 0 0 ^ l c h o p h é p t h ử đ ị n h t í n h v à 2 0 0 ^ l c h o p h é p t h ử b ư ớ c đ ầ u đ á n h 141 g i á đ ộ t i n h k h i ế t c ủ a s ả n p h ẩ m I C T t r o n g p h ầ n “ T ổ n g h ợ p t ạ p c h ấ t C c ủ a t e r a z o s i n ” . T u y n h i ê n d u n g m ô i m e t h a n o l l à 1 c h ấ t d ễ b a y h ơ i ở n h i ệ t đ ộ p h ò n g t h í n g h i ệ m n ê n k h á t h u ậ n l ợ i c h o v i ệ c đ ư a 1 0 0 ^ l t ớ i 2 0 0 ^ l d u n g d ị c h I C T l ê n t r ê n b ả n m ỏ n g . V ề p h ư ơ n g p h á p H P L C đ ị n h t í n h , đ ị n h l ư ợ n g n g u y ê n l i ệ u I C T H i ệ n n a y p h ư ơ n g p h á p H P L C m à l u ậ n á n x â y d ự n g đ ư ợ c d ù n g đ ể đ ị n h t í n h , đ ị n h l ư ợ n g n g u y ê n I C T c h ư a t ừ n g đ ư ợ c c ô n g b ố t r o n g b ấ t k ỳ t à i l i ệ u n à o , đ ã đ ư ợ c t h ẩ m đ ị n h t h e o đ ú n g q u i đ ị n h v à đ ề u đ ạ t y ê u c ầ u . P h ư ơ n g p h á p c ó đ ộ đ ặ c h i ệ u c a o đ ư ợ c k h ẳ n g đ ị n h q u a s ự t á c h k h ỏ i n h a u h o à n t o à n c ủ a c á c c h ấ t I A T , I C T , T E Z , A C D Q t r o n g h ỗ n h ợ p p h â n g i ả i m ặ c d ù đ â y l à n h ữ n g c h ấ t c ó p h ầ n c ấ u t r ú c h ó a h ọ c t ư ơ n g t ự n h a u t r o n g đ ó I A T v à A C D Q l à c á c c h ấ t t h a m g i a v à o q u á t r ì n h t ổ